Escherichia coli and Coliform Archives

Quy trình kiểm tra E. coli và coliforms thường được thực hiện trong các phòng thí nghiệm vi sinh để đánh giá chất lượng vệ sinh của nước, thực phẩm hoặc các mẫu môi trường khác. Dưới đây là quy trình chung, có thể thay đổi tùy theo tiêu chuẩn cụ thể (như ISO, FDA, hoặc các tiêu chuẩn quốc gia):

1. Chuẩn bị mẫu

Thu thập mẫu (nước, thực phẩm, v.v.) một cách vô trùng.
Bảo quản mẫu ở nhiệt độ thích hợp (thường là 4°C) và vận chuyển nhanh chóng đến phòng thí nghiệm.
Nếu cần, pha loãng mẫu với nước vô trùng hoặc dung dịch đệm phù hợp.

Phương pháp kiểm tra

Có nhiều phương pháp để kiểm tra E. coli và coliforms, bao gồm:

a. Phương pháp MPN (Most Probable Number)

Sử dụng môi trường lỏng (như Lactose Broth hoặc Lauryl Tryptose Broth).
Cấy mẫu vào các ống nghiệm chứa môi trường lỏng.
Ủ ở nhiệt độ 35-37°C trong 24-48 giờ.
Quan sát sự thay đổi màu sắc hoặc sinh hơi (dấu hiệu lên men lactose).
Xác định số lượng vi khuẩn dựa trên bảng MPN.

b. Phương pháp màng lọc (Membrane Filtration)

Lọc mẫu qua màng lọc có kích thước lỗ 0.45 µm.
Đặt màng lọc lên đĩa thạch chọn lọc (ví dụ: môi trường EMB – Eosin Methylene Blue hoặc môi trường Endo).
Ủ ở 35-37°C trong 24-48 giờ.
Đếm khuẩn lạc đặc trưng (coliforms thường có màu hồng, E. coli có ánh kim loại xanh).

c. Phương pháp đĩa thạch (Plate Count)

Cấy trực tiếp mẫu lên đĩa thạch chọn lọc (ví dụ: MacConkey Agar hoặc VRBA – Violet Red Bile Agar).
Ủ ở 35-37°C trong 24-48 giờ.
Đếm khuẩn lạc đặc trưng (coliforms thường có màu đỏ hoặc hồng).

d. Phương pháp nhanh (Rapid Methods)

Sử dụng các bộ kit thương mại hoặc hệ thống tự động (ví dụ: PCR, ELISA, hoặc phương pháp phát hiện enzyme).
Cung cấp kết quả nhanh chóng trong vòng vài giờ.

3. Xác nhận kết quả

Đối với các khuẩn lạc nghi ngờ, tiến hành các phép thử xác nhận:
- Thử nghiệm IMViC (Indole, Methyl Red, Voges-Proskauer, Citrate) để phân biệt coli và các vi khuẩn coliforms khác.
- Thử nghiệm sinh hóa (ví dụ: sử dụng API 20E hoặc các bộ kit tương tự).
- PCR hoặc giải trình tự gen để xác định chính xác loài vi khuẩn.

4. Phân tích và báo cáo

Tính toán số lượng vi khuẩn dựa trên phương pháp sử dụng (MPN, CFU/ml, hoặc CFU/g).
So sánh kết quả với tiêu chuẩn cho phép (ví dụ: QCVN, ISO, hoặc FDA).
Lập báo cáo và đưa ra kết luận về chất lượng mẫu.