Quy trình nuôi cấy vi khuẩn Aeromonas là một phương pháp được sử dụng để phân lập và định lượng vi khuẩn Aeromonas trong các mẫu thực phẩm, nước hoặc mẫu sinh học. Aeromonas là vi khuẩn Gram âm, hiếu khí hoặc kỵ khí tùy ý, thường được tìm thấy trong môi trường nước và có thể gây bệnh cho người và động vật. Dưới đây là các bước cơ bản của quy trình nuôi cấy vi khuẩn Aeromonas:

1. Chuẩn bị mẫu

• Lấy mẫu: Lấy mẫu thực phẩm, nước hoặc mẫu sinh học cần kiểm tra một cách vô trùng.
• Xử lý mẫu:
  • Nếu là mẫu thực phẩm rắn, nghiền nhỏ và pha loãng trong dung dịch pha loãng vô trùng (ví dụ: nước muối sinh lý 0.85%).
  • Nếu là mẫu nước, có thể sử dụng trực tiếp hoặc pha loãng tùy thuộc vào mức độ nhiễm khuẩn dự đoán.

2. Pha loãng mẫu

• Thực hiện các bước pha loãng liên tiếp (thường là 1:10) để giảm nồng độ vi khuẩn trong mẫu.
• Ví dụ: 1 ml mẫu pha loãng vào 9 ml dung dịch pha loãng, tạo ra độ pha loãng 10^-1. Lặp lại để tạo ra các độ pha loãng cao hơn (10^-2, 10^-3, …).

3. Chọn môi trường nuôi cấy

• Aeromonas có thể được nuôi cấy trên các môi trường chọn lọc và khác biệt như:
  • Môi trường Rimler-Shotts (RS): Môi trường chọn lọc cho Aeromonas, ức chế các vi khuẩn khác.
  • Môi trường Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar (TCBS): Thường dùng để phân lập Vibrio, nhưng một số chủng Aeromonas cũng có thể mọc.
  • Môi trường Blood Agar (BA): Dùng để quan sát khả năng tan máu của Aeromonas.
  • Môi trường Tryptic Soy Agar (TSA) hoặc Plate Count Agar (PCA): Dùng để nuôi cấy tổng vi khuẩn hiếu khí.

4. Cấy mẫu

• Cấy trải: Lấy một lượng nhỏ mẫu đã pha loãng (thường là 0.1 ml hoặc 1 ml) và cấy lên bề mặt môi trường thạch.
• Cấy sâu: Nếu sử dụng phương pháp đổ đĩa, trộn mẫu với thạch đã làm nguội (khoảng 45°C) rồi đổ vào đĩa petri.
• Ủ ấm: Đặt các đĩa petri vào tủ ấm ở nhiệt độ 30-35°C trong 24-48 giờ.

5. Quan sát và phân lập khuẩn lạc

• Sau thời gian ủ ấm, quan sát các khuẩn lạc mọc trên đĩa:
  • Aeromonas thường tạo khuẩn lạc màu trắng, trơn bóng, đường kính 1-3 mm trên môi trường chọn lọc.
  • Trên môi trường Blood Agar, Aeromonas có thể tạo vùng tan máu (hemolysis) do khả năng tiết enzyme hemolysin.
• Chọn các khuẩn lạc nghi ngờ và cấy chuyển sang môi trường mới để phân lập thuần khiết.

6. Định danh vi khuẩn

• Nhuộm Gram: Aeromonas là vi khuẩn Gram âm, hình que.
• Kiểm tra sinh hóa: Thực hiện các phản ứng sinh hóa để xác nhận Aeromonas, bao gồm:
  • Oxidase test: Aeromonas dương tính.
  • Catalase test: Aeromonas dương tính.
  • Khả năng lên men đường: Aeromonas có thể lên men glucose, sucrose, và một số đường khác.
• Phương pháp phân tử: Nếu cần độ chính xác cao, có thể sử dụng PCR hoặc giải trình tự gen để xác định loài cụ thể.

7. Đếm khuẩn lạc và tính toán kết quả

• Đếm số lượng khuẩn lạc trên các đĩa có số lượng khuẩn lạc trong khoảng 30-300.
• Tính toán số lượng vi khuẩn Aeromonas trong mẫu ban đầu dựa trên số lượng khuẩn lạc và độ pha loãng.
• Kết quả được báo cáo dưới dạng CFU/g hoặc CFU/ml

8. Báo cáo và phân tích

• Báo cáo kết quả số lượng Aeromonas trong mẫu.
• Đánh giá mức độ nhiễm khuẩn và so sánh với tiêu chuẩn an toàn thực phẩm hoặc nước.